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原代心肌细胞研究要注意些什么?

更新时间:2021-11-24点击次数:1709

  作为主要的研究模型,原代心肌细胞被广泛应用于心血管研究。那么我们在研究过程中都要注意些什么呢?

  1、新生鼠年龄的选择新生鼠心肌细胞在出生后3天内具有部分增殖能力,而成年鼠心肌细胞为终末分化细胞,不再具有分裂增殖能力。因此,大鼠出生时间越短,离体心肌细胞存活率越高,越容易贴壁。大量观察表明,选择1~3日龄大鼠分离心肌细胞进行原代培养是理想的,尤其是半日龄大鼠。

  2、消化酶的选择和使用

  新生大鼠原代心肌细胞间可采用组织块法和消化法分离。前者较少使用,因为难以获得密度均匀的细胞和控制成纤维细胞的生长。消化法中常用的酶有3种:胰蛋白酶、胶原酶I或II和透明质酸酶。透明质酸酶主要与胰蛋白酶或胶原酶结合使用。胰蛋白酶作用强,容易对心肌细胞造成损伤。胶原酶作用温和,能消化细胞间质中的胶原纤维,释放细胞,对细胞损伤小。在新生大鼠的心肌组织中,胶原酶Ⅰ主要是胶原Ⅰ。文献报道胶原酶的工作浓度一般为0.6~1G·L1,我们采用0.8g·L1。现在最好用胶原酶。

  3、掌握消化程度

  新生大鼠心肌细胞对酶消化非常敏感,过度消化会导致肌原纤维,增加细胞死亡率或失去粘附和搏动性;由于消化不充分,细胞聚集成簇,难以区分细胞边界和形态观察。在消解过程中使用磁力搅拌器时,应注意1)转速一般控制在60~80R·Min1左右。(2)每次消化的时间必须结合消化酶的浓度来确定。(3)吹走粘附在搅拌器上的心肌组织,使酶液充分接触组织。(4)适宜的温度为35~37℃(5)当组织由红变白并呈半透明状时,应停止消化。

  4、接种细胞密度

  原代心肌细胞间的接种密度不仅影响细胞间的相互接触,从而影响细胞对肥大刺激的反应,而且影响长期培养细胞的存活率。应准确计算接种细胞的绝对数。一般来说,单位面积的细胞数应根据实验的观察目的来确定。

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