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原代心肌细胞间的培养是为了什么?

更新时间:2022-01-11点击次数:1515
  原代心肌细胞间作为主要研究模型广泛应用于心血管研究,经过长期的尝试,我们实验室找到了一些行之有效的方法,积累了一些经验。总结如下:
  1、细胞分散和接种均匀度
  分离出来的心肌细胞在溶液中Ca2+的作用下容易结块,因此,在差动贴壁前后,应将心肌细胞轻轻吹吹多次,形成单一分散状态。接种后,心肌细胞应均匀分布在培养板上避免细胞聚集到培养孔中心另外,将培养板放入培养箱后,用滴管轻轻吹每个孔中心部分2~3次,但要特别注意避免污染。

 

原代心肌细胞间
 

 

  2、成纤维细胞的抑制和血清类型的选择
  成纤维细胞比原代心肌细胞间更容易贴壁,具有分裂和增殖的能力。差异粘附后,少量成纤维细胞仍混合在心肌细胞中。如果处理不当,它们很容易长成优势细胞溴脱氧尿苷(BrdU)会干扰细胞有丝分裂,因此BrdU通常用于抑制成纤维细胞的生长,但如果使用胎牛血清培养细胞,则很难BrdU*抑制成纤维细胞的生长,因为胎牛血清中含有许多促有丝分裂因子,使用小牛血清可以克服这种现象,获得90%以上的心肌细胞。
  3、换液时间
  观察原代心肌细胞间形态时,接种密度低,贴壁心肌细胞数减少。为避免因更换溶液而丢弃有活力的心肌细胞,接种后48小时应更换溶液,这样不仅贴壁心肌细胞数量明显增加,而且BrdU的作用时间更长,对成纤维细胞的抑制作用更明确此外,其与0.1g?L1BSA对心肌细胞黏附率和凋亡率无显着影响。
  4、防污染措施
  除无菌操作等常规技术方法外,还应特别注意以下几点:(1)取心时避免切开消化道较安全的方法是切入剑突上肋,不涉及腹腔,减少污染机会(2)条件允许的情况下,新生大鼠心肌细胞不应与其他细胞在同一培养箱中共培养,以防止交叉污染(3)培养的心肌细胞的观察和拍照每次时间过长,否则不仅会改变培养基的pH值,还会增加污染的概率。
 
 
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