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细胞培养过程中出现支原体污染,该怎么办?

发布时间: 2022-02-23  点击次数: 524次

细胞培养过程中出现支原体污染,该怎么办?

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谨记:对抗污染,预防大于一切!


细胞培养.png

在细胞培养过程中,很多小伙伴儿一直受到支原体污染的困扰,我自己养的细胞曾经也遇到过支原体污染,深受其害呀!针对于支原体污染来说,大家一定注意预防!如果已经发现了一丝丝污染迹象,就要做到早发现、早挽救!如果细胞能够救回来,还是可以继续实验的,不耽误实验进度。不过,确实也很难彻底清除啊!如果说实在救不回来,那就再买一株新的细胞吧!最后,要买细胞的同学和老师,可以电话或邮箱联系我们哦!

支原体污染对细胞培养造成多方面的不良影响,已经成为在细胞培养时的一个严重问题,严重干扰实验结果的可信度。因此,定期进行支原体检测和去除,确保无支原体存在细胞培养体系内才能获得准确有效的实验数据。

什么是支原体(Mycoplasma)

支原体是1898年Nocard等发现的一种类似细菌但不具有细胞壁的原核微生物,能在无生命的人工培养基上生长繁殖,直径50-300nm,能通过细菌滤器。过去曾称之为类胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-like organism,PPLO)。1967年正式命名为支原体。

支原体模式图.jpg

支原体又称霉形体,支原体细胞中可见的细胞器只有核糖体(支原体是原核细胞,原核细胞的细胞器只有核糖体)。支原体是目前发现的smallest、simplest的原核生物,可以轻松地通过滤膜,混入培养系统中,呈高度多形性,多数呈球形,也有杆形、丝状、分支状等多种形态。通常依附在细胞膜表面,支原体没有刚性的细胞壁,因此普通的抗生素对它根本不起作用,实验室常见的种类有:口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、人型支原体、唾液支原体、肺支原体和梨支原体等。

支原体污染的后果

细菌和真菌造成的污染相对比较容易检测、预防和去除,然而支原体造成的污染很难察觉,即使生长密度高达 10^7-10^9 CFU/mL,也很难有污染迹象(浑浊、pH变化等)。支原体污染后会导致细胞生长变慢,状态变差,不会马上使细胞致死,但会影响细胞内的各种参数,如改变细胞膜抗原性,改变细胞新陈代谢,干扰核酸的合成,改变 DNA 转染效率,导致染色体畸变等。 

一阶扇形图.png

支原体污染来源

1. 工作环境的污染

2. 培养基或其他试剂的污染

3. 污染支原体的细胞造成的交叉污染

4. 实验器材带来的污染

5. 操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)

6. 用来制备细胞的原始组织或器官的污染。

细胞遇到支原体污染,该怎么办?

1. 疑似支原体污染,可通过检测来确认是否污染;

2. 经检测没有发现支原体污染,可采用支原体预防试剂,在平时实验中做好环境和实验用具的消毒工作;

3. 经检测确为支原体污染,使用支原体去除试剂进行挽救;如果救不回来的,只能重新复苏一管或者引进新的细胞;如果能够挽救回来,后续实验中要定期采用支原体预防试剂,避免支原体的污染。



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