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原代细胞分离培养有哪些注意事项?

发布时间: 2022-04-13  点击次数: 335次
  原代细胞分离培养有哪些注意事项?
  1、组织块培养法
  (1)接种后的前3天,观察和移动时注意不要引起液体振荡。避免频繁的翻倒和振动,否则组织块不易附着在瓶壁上或附着后脱落飘浮。
  (2)加入的培养基不宜过多,以免浸泡的组织因轻微波动而脱落。
  (3)细胞向外迁移时,注意记录并清除漂浮的组织块和残留细胞。它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长。
  (4)为促进组织块尽快贴在培养瓶上,可在种植前在培养瓶底壁涂上一层薄薄的胶原蛋白。

 

原代细胞分离培养
 

 

  2、贴壁原代细胞
  (1)原代细胞分离培养的分离细胞一次接触体外环境时,会相互影响。这些细胞之间可以产生一些促生长活性物质,促进细胞的存活和生长。如果接种细胞的密度过低,细胞间的促生长作用就很小,细胞分散后很难适应从体内组织环境到独立生存环境的变化过程。如果接种的细胞密度过高,会导致营养供给不足,代谢废物迅速堆积,需要频繁换液和通过。
  (2)适当提高原代培养接种的细胞密度,为培养细胞提供更多与体内相似的细胞间相互作用,将大大提高原代培养细胞在体外的存活率。当细胞适应体外环境后进行传代培养时,以较低的密度进行接种和培养。
  (3)接种后的细胞尽快贴壁是培养成功的关键。接种后可将培养瓶放入培养箱中培养3h~5h。待细胞贴壁后,可补充培养基继续培养。
  3、悬浮型原代细胞
  (1)原代细胞分离培养细胞必须保持悬浮状态。可以通过增加培养基的粘度来悬浮细胞,例如在培养基中加入低浓度的透明质酸复合物。将培养基加入带搅拌装置的培养容器中,最少5ml,否则搅拌时会产生气泡,对细胞造成损伤。这种方式要注意搅拌速度不要太快,否则培养基会溢出,容易造成污染。如果培养基的量小于5ml,可以使用旋转瓶进行培养。更换悬浮培养细胞溶液时,注意不要吸出细胞。
  (2)可悬浮培养的细胞一般活力强,体外分裂增殖快,营养物质消耗大,换液时间间隔短。
 
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