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原代细胞分离与培养

发布时间: 2021-08-18  点击次数: 575次

原代细胞(primary cell)是指从生物体获取细胞直接培养。通常,把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。由于细胞刚从活体组织分离出来,因此原代细胞更接近于生物体内的生活状态,且生物性状尚未发生很大改变。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段,同时也为以后传代培养创造条件。

血旺细胞.jpg

原代细胞的分离与培养

常用的原代细胞培养方法有组织块培养分散组织培养

组织块培养:是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上,加入培养基后进行培养。

组织块培养法是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法。将组织块剪切成小块后,接种于培养瓶,组织小块贴壁24h或更长时间后,细胞就从组织四周游出。但由于在反复剪切和接种过程中对组织块的损伤,并不是每个小块都能长出细胞。用于组织块培养的培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理,如:预先涂以鼠尾胶原薄层,以利于上皮样细胞等的生长。

分散组织培养:是将组织块从机体中取出离散成单个细胞,置于合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。分散组织培养也是常用的一种原代细胞培养方法,通常用机械法或化学法将组织块分散为单细胞。如欲从胎儿或新生儿的组织分离到活性较好的游离细胞,经典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和胶原酶)消化细胞间的结合物,或用金属离子螯合剂(如EDTA)除去细胞互相粘着所依赖的Ca2+,再经机械轻度振荡,使之成为单细胞。

注意事项:

1. 取材的组织要尽快培养。如若不能及时培养,可将组织浸泡于培养液内,放置于冰浴或4℃冰箱中,如果组织块很大,应切成1cm3以下的小块再低温保存,但时间不能超过24h。

2. 从消化道、周围有坏死组织等污染因素存在的区域取材,可用含500~1000u/ml的青-链霉素BSS液漂洗5~10min,或用10%达克宁注射液冲洗浸泡10min再作培养。

3. 组织块不易贴壁,可预先在瓶壁涂薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。

4. 原代培养的1~2d内要特别注意观察是否有细菌、真菌、霉菌的污染,一旦发现,要及时清除。

原代细胞的应用前景

原代细胞在细胞学研究、遗传学研究、肿瘤研究、药物筛选、细胞移植、类器官培养等众多研究领域备受欢迎,且原代细胞在生物医药领域的应用市场前景广阔。

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