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如何选择合适的内参抗体?

发布时间: 2021-09-16  点击次数: 938次

如何选择合适的内参抗体?


Tips:在选择内参抗体时,我们需要遵循几个原则:

1.种属来源
哺乳动物的样本需要选择哺乳动物中稳定表达的蛋白作为内参,同样的,植物样本需要选择植物中稳定表达的蛋白作为内参。


2. 细胞定位
靶标蛋白的细胞定位不同,适合的内参也不同。如全细胞裂解液可选择beta-actin、beta-tubulin等,膜蛋白一般选择Na K ATPase,核蛋白则选择Lamin B1、Histone H3等。

内参.png

3. 分子量
内参蛋白的分子量需要与目标蛋白的分子量有所区别,否则两者条带无法分开。一般目的蛋白与内参蛋白大小至少相差5K Da以上。


4. 表达因素
内参选择还需要考虑实际的实验环境。GAPDH是代谢类蛋白,在活组织中表达较稳定。beta-actin和beta-tubulin是结构蛋白,不同组织的细胞结构会有差异性。


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