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RNA pull down实验技术

发布时间: 2021-09-23  点击次数: 1781次

RNA pull down实验技术


1. 实验原理

RNA pull down是体外研究RNA与蛋白互作的重要技术该技术是用生物素标记体外转录的靶RNA分子,再用链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体,洗脱得到RNA结合蛋白质。再通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合;或通过质谱仪检测可以筛选出与靶RNA结合的蛋白。

生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用;其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后,可以纯化出与该核酸结合的各种生物大分子复合物。

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2. 实验流程

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1)探针设计及标记:体外转录或合成获取RNA,生物素标记;

2)pull down:与细胞裂解液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素磁珠结合,从而把靶RNA结合蛋白从细胞裂解液中分离出来,经过洗涤将非特异性结合蛋白质去除;最后,洗脱得到与靶RNA结合的蛋白质复合物;

3)互作蛋白质鉴定:再经过Western Blot(WB)或质谱(MS)鉴定蛋白质。

3. 服务内容

1)体外转录或合成RNA,生物素标记;

2)细胞培养与细胞裂解液制备;

3)pull down捕获互作蛋白;

4)Western blot验证互作蛋白;

5)MS筛选鉴定互作蛋白。

4. 交付结果

1)提供详细、完整的实验报告;

2)客观公正的原始数据和实验分析结果。

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