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DNA pull down实验技术

发布时间: 2021-09-23  点击次数: 1128次

DNA pull down实验技术

1. 实验原理

DNA pull down体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA 片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,纯化出与DNA 片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做Western blot检测特定蛋白是否与靶DNA 片段结合;做质谱鉴定即可筛选出与DNA 片段可能互作的蛋白信息(如:转录因子、组蛋白等)。

生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用;其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后,可以纯化出与该核酸结合的各种生物大分子复合物。

DNA pull-down.png

2. 实验流程

DNA pull down.png

1)探针设计及标记:针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;

2)Pull down:细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,靶DNA可以和DNA探针特异性结合,纯化出与靶DNA 片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,洗脱得到与靶DNA结合的蛋白质复合物;

3)互作蛋白质鉴定:再经过Western Blot或质谱(MS)鉴定蛋白质。

3. 技术服务

1)DNA探针的设计与合成;

2)细胞培养与核蛋白提取;

3)Pull down捕获互作蛋白;

4)Western blot验证;

4)MS鉴定可能的互作蛋白。

4. 交付结果

1)客观公正的实验原始数据和分析结果;

2)提供详细、完整的实验报告。


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