说说关于细胞外泌体研究的几个重要问题

　　外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡，其大小为30-150nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。外泌体广泛存在于细胞培养上清以及各种体液中，细胞外泌体研究是近些年研究的热点。

　　

　　细胞外泌体主要原理是根据外泌体的密度、粒径、沉降系数和亲和力等差异进行分离，提取方法包括传统的差速离心、密度梯度离心，以及后来发展的超滤法、聚合物沉淀法、免疫分离、隔离筛选法、体积排阻色谱法等。这些方法各有利弊。

　　

　　细胞外泌体研究常见问题：

　　

　　1、培养细胞时，如何避免血清来源的外泌体污染？

　　

　　细胞培养离不开血清，而血清中一般都含有外泌体，为避免血清外泌体的干扰，建议通过超速离心的方法自制去外泌体血清或者使用商品化的去外泌体血清进行细胞培养。

　　

　　2、细胞培养过程中的死细胞是否会影响外泌体的提取？

　　

　　会。细胞凋亡过程会释放大量囊泡，在外泌体的提取纯化过程中会污染活细胞产生的外泌体。所以在收获细胞时，死亡细胞比例最好不要超5%。

　　

　　3、分离细胞上清外泌体需要多少体积？

　　

　　不同细胞系需要的量会有差异。释放量较高的细胞系，细胞上清需要几毫升即可；释放量低的细胞系则可能需要上百毫升，需要做预实验摸索。

　　

　　细胞外泌体研究通常与高通量测序的研究紧密，大致可以分为三大类：

　　

　　1、表达谱：特点是短平快，通常以测序数据为主要内容，影响因子3-5；

　　

　　2、分子标志物：特点是在表达谱基础上加入大量样本验证，建立ROC、KM曲线，分析分子与临床疾病的相关性为主，文章影响影子3-10；

　　

　　3、分子机制研究：要做到细胞功能、机制研究深度，因此工作量较大，影响因子也较高。