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C57小鼠皮肤成纤维细胞原代培养的方法

发布时间: 2022-07-14  点击次数: 55次
                   实验方法


      1. 将实验小鼠脱颈处死,75%乙醇浸泡5min,固定,备皮,取背部皮肤至于含双抗的冷PBS缓冲液中。

      2. 仔细剥离脂肪,血管等多余组织,PBS清洗,加胰酶消化1h。

      3. 分离真表皮,去除表皮后,PBS清洗3次。

      4. 将真皮部分于培养皿内剪碎,加入适量胰酶,转移至15ml离心管内,37℃恒温水浴消化1h。

      5. 消化结束后,加入H-DMEM完全培养基终止反应,1000rpm离心5min,弃上清。

      6. PBS清洗一遍,离心弃上清。

      7. 将清洗后的组织块均匀铺于6cm培养皿内,加入2ml完全培养基,37℃,5%CO2培养箱内培养24h。

     8. 第二天,补充培养基至5ml,继续培养,3-4天后有细胞游出。

     9. 7天后已有大量细胞游出,去除组织块并换新鲜培养基继续培养。


  • 实验图例

取材&分离

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细胞培养

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图片
END

 

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