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原代细胞分离培养中的注意事项

发布时间: 2022-12-08  点击次数: 239次
  原代培养的细胞,来源于胚胎、组织器官和外周血,通过特殊的分离方法制备,称为原代细胞。初步分离得到的细胞具有与体内细胞相似的生物学特性,是研究生进行与物体相关的生命活动的理想材料。
  
  原代细胞分离培养是从体内取出人/小鼠模型动物特异性细胞,用胰蛋白酶和螯合剂(EDTA)处理,分散成单细胞,并在合适的培养基中培养,使得细胞能够存活、生长和繁殖的过程。原代培养是指细胞、组织和器官直接从体内取出后立即进行培养。此时的细胞保持了原细胞的基本性质,如果是正常细胞,则仍保留二倍体数。但实际上,一代至第十代内培养的细胞一般称为原代细胞培养。常用的原代培养是组织块培养和分散细胞培养。
 
  

原代细胞分离培养

 
 

  原代细胞分离培养中的注意事项:
  
  1、原代培养材料的选择,尽量选择繁殖能力强的组织,如胚胎、幼体或肿瘤组织等。
  
  2、注意无菌操作。
  
  3、整个取样操作要迅速,尤其是孕鼠要在乙醇中浸泡1min左右,时间不宜过长,以保证胚胎细胞的活性。
  
  4、采用消化法时,胰酶的温度应低于37℃,胰酶的浓度应仅为平时消化细胞浓度的一半。因为这个过程不像细胞消化培养时的1~10min,而是至少20min,一次消化的细胞在这个胰蛋白酶消化液中继续消化10min以上。所以胰酶不能作用太强,否则这些细胞容易受损,不容易存活。
  
  5、如果采用组织块法,应在组织块略干,能贴在瓶壁上时,与培养液接触,使组织块能浮起。如果组织块不贴在壁上,细胞就不容易生长,即使生长也不贴在瓶壁上,生长中的细胞因为无法观察而无法收集。
  
  6、在原代培养操作中,也可用无血清的DMEM或PBS洗涤子宫、胚胎或组织块等。
  
  7、新生乳鼠也可作为原代细胞分离培养的培养材料。此时应将乳鼠浸泡在75%的乙醇中2~3分钟,使皮肤充分消毒。因为乳鼠的原代培养有较高的污染概率,所以要小心处理,避免细菌污染。乳鼠原代培养细胞存活率不如胚胎细胞培养成功率高。
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