原代细胞分离培养中的注意事项

　　原代培养的细胞，来源于胚胎、组织器官和外周血，通过特殊的分离方法制备，称为原代细胞。初步分离得到的细胞具有与体内细胞相似的生物学特性，是研究生进行与物体相关的生命活动的理想材料。

　　

　　原代细胞分离培养是从体内取出人/小鼠模型动物特异性细胞，用胰蛋白酶和螯合剂(EDTA)处理，分散成单细胞，并在合适的培养基中培养，使得细胞能够存活、生长和繁殖的过程。原代培养是指细胞、组织和器官直接从体内取出后立即进行培养。此时的细胞保持了原细胞的基本性质，如果是正常细胞，则仍保留二倍体数。但实际上，一代至第十代内培养的细胞一般称为原代细胞培养。常用的原代培养是组织块培养和分散细胞培养。
 

　　

　　原代细胞分离培养中的注意事项：

　　

　　1、原代培养材料的选择，尽量选择繁殖能力强的组织，如胚胎、幼体或肿瘤组织等。

　　

　　2、注意无菌操作。

　　

　　3、整个取样操作要迅速，尤其是孕鼠要在乙醇中浸泡1min左右，时间不宜过长，以保证胚胎细胞的活性。

　　

　　4、采用消化法时，胰酶的温度应低于37℃，胰酶的浓度应仅为平时消化细胞浓度的一半。因为这个过程不像细胞消化培养时的1~10min，而是至少20min，一次消化的细胞在这个胰蛋白酶消化液中继续消化10min以上。所以胰酶不能作用太强，否则这些细胞容易受损，不容易存活。

　　

　　5、如果采用组织块法，应在组织块略干，能贴在瓶壁上时，与培养液接触，使组织块能浮起。如果组织块不贴在壁上，细胞就不容易生长，即使生长也不贴在瓶壁上，生长中的细胞因为无法观察而无法收集。

　　

　　6、在原代培养操作中，也可用无血清的DMEM或PBS洗涤子宫、胚胎或组织块等。

　　

　　7、新生乳鼠也可作为原代细胞分离培养的培养材料。此时应将乳鼠浸泡在75%的乙醇中2~3分钟，使皮肤充分消毒。因为乳鼠的原代培养有较高的污染概率，所以要小心处理，避免细菌污染。乳鼠原代培养细胞存活率不如胚胎细胞培养成功率高。