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原代心肌细胞间的培养都有哪些抗污染措施?

更新时间:2022-11-09点击次数:1345
  成纤维细胞比心肌细胞更容易贴壁,具有分裂增殖能力。差异贴壁后,原代心肌细胞间中仍有少数成纤维细胞混杂,如果处理不当,很容易长成优势细胞。溴脱氧尿苷(BrdU)可以干扰细胞有丝分裂,因此BrdU常规用于抑制成纤维细胞的生长。但如果用胎牛血清培养细胞,由于胎牛血清含有很多促有丝分裂因子,BrdU很难抑制成纤维细胞的生长。使用小牛血清可以克服这种现象,获得90%以上的心肌细胞。
  
  观察原代心肌细胞间形态时,接种密度低,贴壁心肌细胞数量减少。为了防止存活的心肌细胞随着液体的更换而被丢弃,液体的更换应在接种48小时后进行。这不仅会显著增加贴壁心肌细胞的数量,还会使BrdU需要更长的时间来抑制成纤维细胞。另外,其和0.1gL1BSA能为心肌细胞提供营养支持,但对心肌细胞的黏附率和凋亡率无明显影响。
  
  除无菌操作等常规技术方法外,还应特别注意以下几点:获取心脏时,避免切开消化道。比较安全的方法是切开剑突上肋,不涉及腹腔,减少污染机会。在条件允许的情况下,避免新生大鼠心肌细胞与其他细胞在同一培养箱中共培养,防止交叉污染。培养心肌细胞的观察。
  
  原代心肌细胞间培养液适宜的pH范围为7.2~7.4。配制和使用培养基时,应注意:
  
  1、过滤后pH值会增加0.1~0.3。
  
  2、培养基中加入血清后,pH值会降低,降低的程度与血清的质量和含量有关。
  
  3、及时更换液体。
  
  4、配制好的培养液不宜在4℃下长期保存。这是因为培养液中的CO2会溢出,培养液的pH会升高。每种配制好的培养液应尽可能在2周内用完,否则应部分保存在-20℃下。使用前要补充谷氨酰胺和碳酸氢钠,再次过滤后才能使用。
  
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