分子互作实验IP/CO-IP免疫共沉淀

一、技术简介

IP（免疫沉淀，Immunoprecipitation）和Co-IP（免疫共沉淀，Co-Immunoprecipitation）是研究蛋白质功能及相互作用的核心技术，广泛应用于分子生物学和细胞生物学领域。

二、技术原理

IP通过特异性抗体与目标蛋白结合，利用抗体将靶标蛋白（即抗原）分离出来，从而检测某一种蛋白的表达情况；而CO-IP是在IP基础上，验证蛋白质间的相互作用。通过捕获一个蛋白（诱饵蛋白），检测与其结合的互作蛋白（靶蛋白），从而特异性富集所研究的目的蛋白，进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。

三、应用场景

1.IP：富集低丰度蛋白用于质谱鉴定（IP-MS）、验证抗体特异性。

2.Co-IP：研究转录因子复合物、激酶-底物相互作用及验证已知互作或发现新互作伙伴（如信号通路复合物）。

四、技术优势

1.IP：具有高特异性，依赖抗体-抗原的专一性结合。

2.灵活性：支持物可选磁珠（操作简便、自动化兼容）或琼脂糖（高结合容量）。

3.Co-IP：体内真实性：研究的是体内自然状态下的蛋白质互作，可反应比较真实的蛋白互作。

五、样本类型

新鲜细胞（贴壁细胞/悬浮细胞）、冻存细胞、冻存组织、裂解液样本。

六、样本需求

细胞样本：约5×10^6个（可以是2个6cm皿，或以悬浮细胞形式存储于离心管中，或2个T25瓶）；

冻存组织：约40mg；裂解液样本：蛋白浓度不低于2mg/mg，蛋白总量不低于3mg。

七、样本准备&运输

活细胞样本：距离较近的可提供新鲜样本，将培养在皿/T25瓶/离心管内的新鲜细胞样本常温快递（最迟次日达）运输，本市内可闪送或亲自递送，距离较远的，可-80℃冻存细胞干冰运输；

组织样本&裂解液样本：-80℃冻存干冰运输。

八、需提供的试剂

检测用IB抗体和IP抗体

九、实验周期

1-2周（不包含质谱）

十、其他

后续检测Western blot/蛋白质谱