对于耐药细胞株的培养方法你了解多少？

　　耐药细胞株在长期保存和传代过程中受到各种不稳定因素的影响，例如，细胞遗传污染和基因变异。因此，经过一段时间后，细胞的遗传物质可能发生变化，导致其生物学特性发生变化，从而降低动物模型的一致性和可比性。因此，为了保证动物模型的稳定性，必须对细胞株的质量进行监测。那么你对它的培养方法了解多少？

　　所有转染肿瘤和病毒的细胞都被认为具有潜在的生物危害，必须在二级生物安全平台上操作，请注意防护。所有与该单元接触的废液和容器只能在高压灭菌后丢弃。收到耐药细胞株后，用倒置透镜观察整个细胞的生长情况。

 

　　1、若细胞未满，用75%酒精喷整瓶消毒，放入超级菌台，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养基，继续换10ml新鲜培养基后培养。

　　2、如果细胞满了，可以传代培养。具体步骤如下：

　　（1）弃去培养基，用PBS（不包括钙和镁离子）洗涤1-2次。

　　（2）在培养瓶中加入1ml消化液，倒置在37℃培养箱中预热1-3分钟，然后将培养瓶翻转10-30秒，观察倒置显微镜下的细胞消化。如果大部分细胞变成圆形，迅速收回控制台，轻敲几下培养瓶，然后加入少量*培养基终止消化。

　　（3）按6-8ml/瓶加入*培养基，轻轻打匀，吸出一半，分装到新的培养瓶中。除非另有说明，接受细胞后的继代培养一般为一到二。

　　耐药细胞株的培养注意事项：

　　1、细胞在低倍镜（4倍或5倍物镜）下观察，否则无法准确判断细胞的传代密度。要查看细胞的形态，请使用10x或20x物镜。

　　2、瓶内运输介质不可重复使用。请使用具有双抗体的新培养基。细胞冷冻后，培养基不得添加任何抗生素。

　　3、有些细胞没有牢固地贴在墙上。如果发现贴壁细胞脱落，可以离心吹干后接种到新瓶中。