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对于耐药细胞株的培养方法你了解多少?

发布时间: 2022-01-18  点击次数: 78次
  耐药细胞株在长期保存和传代过程中受到各种不稳定因素的影响,例如,细胞遗传污染和基因变异。因此,经过一段时间后,细胞的遗传物质可能发生变化,导致其生物学特性发生变化,从而降低动物模型的一致性和可比性。因此,为了保证动物模型的稳定性,必须对细胞株的质量进行监测。那么你对它的培养方法了解多少?
  所有转染肿瘤和病毒的细胞都被认为具有潜在的生物危害,必须在二级生物安全平台上操作,请注意防护。所有与该单元接触的废液和容器只能在高压灭菌后丢弃。收到耐药细胞株后,用倒置透镜观察整个细胞的生长情况。

 

耐药细胞株
 

 

  1、若细胞未满,用75%酒精喷整瓶消毒,放入超级菌台,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养基,继续换10ml新鲜培养基后培养。
  2、如果细胞满了,可以传代培养。具体步骤如下:
  (1)弃去培养基,用PBS(不包括钙和镁离子)洗涤1-2次。
  (2)在培养瓶中加入1ml消化液,倒置在37℃培养箱中预热1-3分钟,然后将培养瓶翻转10-30秒,观察倒置显微镜下的细胞消化。如果大部分细胞变成圆形,迅速收回控制台,轻敲几下培养瓶,然后加入少量完全培养基终止消化。
  (3)按6-8ml/瓶加入完全培养基,轻轻打匀,吸出一半,分装到新的培养瓶中。除非另有说明,接受细胞后的继代培养一般为一到二。
  耐药细胞株的培养注意事项:
  1、细胞在低倍镜(4倍或5倍物镜)下观察,否则无法准确判断细胞的传代密度。要查看细胞的形态,请使用10x或20x物镜。
  2、瓶内运输介质不可重复使用。请使用具有双抗体的新培养基。细胞冷冻后,培养基不得添加任何抗生素。
  3、有些细胞没有牢固地贴在墙上。如果发现贴壁细胞脱落,可以离心吹干后接种到新瓶中。
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