细胞凋亡检测的常用检测方法有这几种

　　要了解细胞凋亡检测方法，首先要了解细胞凋亡的形态学变化，形态学观察表明细胞凋亡的变化是多阶段的。细胞凋亡往往涉及多个细胞，甚至少数细胞也异步发生。首先细胞体积缩小，连接消失，与周围细胞分离，然后细胞质密度增加，随后会发生一系列变化：线粒体膜电位消失；渗透率变化；将细胞c释放到细胞质中；核质浓度、核膜和核仁碎裂；DNA被降解成180bp-200bp左右的片段，在细胞膜内形成囊泡；丝氨酸膜表面转向磷脂膜内侧；细胞膜结构仍然完好无损。可以将凋亡细胞的残骸分割包裹成若干个凋亡小体而不会溢出。

　　

　　细胞凋亡检测通常包括形态学观察、DNA凝胶电泳、酶联免疫吸附试验（ELISA）、核小体试验、流式细胞术和Westernblot检测。

　　

　　1、形态观察

　　

　　电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩和边缘聚集，常呈新月形，核膜皱缩，细胞质致密，细胞器集中，膜泡或“芽”和凋亡小体和凋亡小体被相邻的吞噬细胞吞噬。

　　

　　2、DNA凝胶电泳

　　

　　细胞凋亡的主要生化特征是染色质凝聚。染色质DNA在核小体单元之间的连接处断裂，形成一个180~200bp的整数寡核苷酸片段。该方法是判断细胞是否发生凋亡的简单方法，更适用于体外培养的非增殖细胞的检测。

　　

　　3、酶联免疫吸附试验（ELISA）核小体试验

　　

　　凋亡细胞的DNA断裂导致细胞质中出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片段组成，可通过ELISA检测。

　　

　　细胞凋亡检测步骤：

　　

　　（1）将凋亡细胞裂解并高速离心，上清液中含有核小体；

　　

　　（2）微量定量板上吸附组蛋白；

　　

　　（3）此外，抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合；

　　

　　（4）辛辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体与核小体上的DNA结合；

　　

　　（5）酶加底物，光度吸收值。