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细胞凋亡检测的常用检测方法有这几种

发布时间: 2022-04-19  点击次数: 101次
  要了解细胞凋亡检测方法,首先要了解细胞凋亡的形态学变化,形态学观察表明细胞凋亡的变化是多阶段的。细胞凋亡往往涉及多个细胞,甚至少数细胞也异步发生。首先细胞体积缩小,连接消失,与周围细胞分离,然后细胞质密度增加,随后会发生一系列变化:线粒体膜电位消失;渗透率变化;将细胞c释放到细胞质中;核质浓度、核膜和核仁碎裂;DNA被降解成180bp-200bp左右的片段,在细胞膜内形成囊泡;丝氨酸膜表面转向磷脂膜内侧;细胞膜结构仍然完好无损。可以将凋亡细胞的残骸分割包裹成若干个凋亡小体而不会溢出。
  
  细胞凋亡检测通常包括形态学观察、DNA凝胶电泳、酶联免疫吸附试验(ELISA)、核小体试验、流式细胞术和Westernblot检测。
  
  1、形态观察
  
  电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩和边缘聚集,常呈新月形,核膜皱缩,细胞质致密,细胞器集中,膜泡或“芽”和凋亡小体和凋亡小体被相邻的吞噬细胞吞噬。
  
  2、DNA凝胶电泳
  
  细胞凋亡的主要生化特征是染色质凝聚。染色质DNA在核小体单元之间的连接处断裂,形成一个180~200bp的整数寡核苷酸片段。该方法是判断细胞是否发生凋亡的简单方法,更适用于体外培养的非增殖细胞的检测。
  
  3、酶联免疫吸附试验(ELISA)核小体试验
  
  凋亡细胞的DNA断裂导致细胞质中出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片段组成,可通过ELISA检测。
  
  细胞凋亡检测步骤:
  
  (1)将凋亡细胞裂解并高速离心,上清液中含有核小体;
  
  (2)微量定量板上吸附组蛋白;
  
  (3)此外,抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合;
  
  (4)辛辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体与核小体上的DNA结合;
  
  (5)酶加底物,光度吸收值。
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