标记细胞株的分离和培养要注意些什么？

　　标记细胞株是细胞系中特定标签（Luc、GFP、RFP等）的稳定转移，该细胞系可用作示踪细胞，为细胞成像和体内成像提供了很大的便利。

　　
 

　　标记细胞株的分离和培养：

　　

　　1、在无菌条件下，取出1-3DSD大鼠的心房组织，然后用PBS清洗组织块两次，然后将组织切成1mm3左右；

　　

　　2、在组织块中加入4ml酶消化液（0.1%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型胶原酶），悬停10s，37℃消化10min，然后用滴定管吹成单细胞悬液，自然沉淀收集取上清，用10%fbs培养基消化终止后置于4℃；

　　

　　3、剩余组织加入3～4ml酶消化液，悬停10s，37℃消化10min，按上述方法收集上清液，消化结束后置于4℃，重复此步骤2次-3次直到组织*消化；

　　

　　4、将细胞消化液用200目不锈钢筛网过滤，1200r/min离心10min，弃上清，沉淀的细胞用10%fbsdmem/f12培养基悬浮，接种于25cm2烧瓶中培养37℃5%co2培养箱；

　　

　　5、差异粘附1h后，根据实验需要吸出培养液接种于6孔板中继续培养。

　　

　　标记细胞株使用注意事项：

　　

　　1、本方法使用悬浮细胞时，必须先离心后吸出上清液并加入DMSO。

　　

　　2、甲臜的形成不仅与活细胞数量成正比，还受作用时间的影响。因此，当样品较多时，测得的OD值可能会随时间而变化。

　　

　　3、MTT溶液呈黄色，需要避光存放，长时间曝光会导致失效。当颜色变为灰绿色时请勿使用。MTT溶液在4℃或更低温度下会凝固。20-25℃水浴中孵育片刻至*溶解即可使用。

　　

　　4、为了您的安全和健康，请穿戴实验室服和一次性手套。