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标记细胞株的分离和培养要注意些什么?

发布时间: 2022-07-19  点击次数: 8次
  标记细胞株是细胞系中特定标签(Luc、GFP、RFP等)的稳定转移,该细胞系可用作示踪细胞,为细胞成像和体内成像提供了很大的便利。
  
 

标记细胞株
 

 

  标记细胞株的分离和培养:
  
  1、在无菌条件下,取出1-3DSD大鼠的心房组织,然后用PBS清洗组织块两次,然后将组织切成1mm3左右;
  
  2、在组织块中加入4ml酶消化液(0.1%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型胶原酶),悬停10s,37℃消化10min,然后用滴定管吹成单细胞悬液,自然沉淀收集取上清,用10%fbs培养基消化终止后置于4℃;
  
  3、剩余组织加入3~4ml酶消化液,悬停10s,37℃消化10min,按上述方法收集上清液,消化结束后置于4℃,重复此步骤2次-3次直到组织完全消化;
  
  4、将细胞消化液用200目不锈钢筛网过滤,1200r/min离心10min,弃上清,沉淀的细胞用10%fbsdmem/f12培养基悬浮,接种于25cm2烧瓶中培养37℃5%co2培养箱;
  
  5、差异粘附1h后,根据实验需要吸出培养液接种于6孔板中继续培养。
  
  标记细胞株使用注意事项:
  
  1、本方法使用悬浮细胞时,必须先离心后吸出上清液并加入DMSO。
  
  2、甲臜的形成不仅与活细胞数量成正比,还受作用时间的影响。因此,当样品较多时,测得的OD值可能会随时间而变化。
  
  3、MTT溶液呈黄色,需要避光存放,长时间曝光会导致失效。当颜色变为灰绿色时请勿使用。MTT溶液在4℃或更低温度下会凝固。20-25℃水浴中孵育片刻至完全溶解即可使用。
  
  4、为了您的安全和健康,请穿戴实验室服和一次性手套。
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