如何选择合适的内参抗体？

如何选择合适的内参抗体？Tips：在选择内参抗体时，我们需要遵循几个原则：1.种属来源哺乳动物的样本需要选择哺乳动物中稳定表达的蛋白作为内参，同样的，植物样本需要选择植物中稳定表达的蛋白作为内参。2.细胞定位靶标蛋白的细胞定位不同，适合的内参也不同。如全细胞裂解液可选择beta-actin、beta-tubulin等，膜蛋白一般选择NaKATPase，核蛋白则选择LaminB1、HistoneH3等。3.分子量内参蛋白的分子量需要与目标蛋白的分子量有所区别，否则两者条带无法分...

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TUNEL法细胞凋亡检测假阳性率高怎么破？

TUNEL法基于对细胞DNA损伤的检测，通常可用于检测组织切片样本和细胞样本，是晚期细胞凋亡检测中常用的方法。那么对于检测过程中常见的假阳性率高的现象是如何产生的呢？1.固定操作不当固定液选择不恰当，固定液浓度过高，固定时间过长，组织切片过厚都会影响固定效果。一般建议选择含4%多聚甲醛的PBS溶液来固定细胞或组织切片，时间在30min左右。2.基因转录水平高基因转录活性高的非凋亡细胞会产生假阳性，例如睾丸组织。3.激发光下长时间照射在强激发光长时间照射下，高浓度的PI会吸收能...

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原代细胞分离与培养

原代细胞(primarycell)是指从生物体获取细胞直接培养。通常，把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。由于细胞刚从活体组织分离出来，因此原代细胞更接近于生物体内的生活状态，且生物性状尚未发生很大改变。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培养创造条件。原代细胞的分离与培养常用的原代细胞培养方法有组织块培养和分散组织培养。组织块培养：是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进行培养。组织块培养法是常用的、...

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