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要根据实际情况选择适合的细胞凋亡检测方法

发布时间: 2022-12-19  点击次数: 52次
  细胞凋亡(apoptosis)是一种在多细胞生物体中发生的程序性细胞死亡形式,属于细胞的正常生理过程,在生物体进化、内环境的稳定以及发育过程中起着重要作用,具有重要生物学意义及复杂的分子生物学机制。
  
  在生物学研究过程中常常需要检测细胞凋亡情况。目前至少有十数种检测细胞凋亡的方法,大致可分为基于细胞形态、生物学功能和生化标记三大类。每一方法都有其优缺点,需要根据实际情况选择适合的细胞凋亡检测方法。
 
  

细胞凋亡检测

 
 

  1、电子显微镜检测方法
  
  在透射电镜下,凋亡细胞体积变小。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosisnuclei),染色质高度盘绕,出现许多空泡结构;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;凋亡晚期出现核解体,产生凋亡小体。
  
  2、细胞核形态染色法
  
  相比细胞凋亡的其他形态变化,利用荧光染料配合荧光显微镜对细胞核形态的观察也是较为直接的指标。常用的DNA特异性染料有:Hoechst、DAPI以及碘化丙啶(PI)。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料;DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色;PI不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来(Annexin-V/PI法)。
  
  3、线粒体膜电位检测
  
  线粒体跨膜电位的下降也是凋亡细胞一个重要特点,是细胞凋亡过程中初期发生的事件(早于核形态的变化和PS的外翻)。一旦线粒体跨膜电位崩溃,细胞就会进入不可逆的凋亡过程。一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine123、DiOC6、JC-1、TMRM等,在线粒体跨膜电位存在的情况下可结合到线粒体基质,通过荧光显微镜观察其荧光的增强或减弱可反应线粒体内膜电负性的增高或降低。
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