EMSA凝胶迁移阻滞实验

一、技术简介

EMSA技术即凝胶迁移或电泳迁移率实验，用于研究DNA/RNA结合蛋白和其相关的DNA/RNA结合序列相互作用的技术；

二、技术原理

将纯化的蛋白或细胞粗提液与标记的DNA或RNA探针一同孵育，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，DNA-蛋白或RNA-蛋白复合物的迁移率比未结合的探针慢，从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。

三、应用场景

1.基因表达调控研究：确定转录因子与DNA的结合位点和结合特性，研究基因表达的调控机制。

2.疾病机理研究：分析疾病相关基因的表达调控异常，探索疾病的发生发展机制。

3.药物靶点发现：筛选和鉴定与疾病相关的DNA结合蛋白，为药物研发提供靶点。

4.信号通路研究：研究信号通路中DNA结合蛋白的活性变化及其对下游基因的影响。

四、技术优势

1.实验操作相对简单，对实验条件要求不苛刻。

2.可检测多种核酸分子大小和结构以及广泛的蛋白大小范围，能在单个反应体系中检测不同蛋白与不同核酸分子的结合情况。

3.生物素标记探针稳定、安全、准确且亲和力高。

五、样本类型

新鲜细胞（贴壁细胞/悬浮细胞）、冻存细胞、冻存组织、细胞核蛋白样本或纯化的转录因子，部分实验亦可使用重组表达的蛋白。

六、样本需求

细胞样本：约1×10^7个（可以是1个10cm皿，或以悬浮细胞形式存储于离心管中，或1个T75瓶）；

冻存组织：约400mg；

植物组织：约2g；细胞核蛋白、纯化转录因子、重组表达蛋白等：每张膜至少提供50ul，浓度不低于0.5mg/ml。

七、样本准备&运输

活细胞样本：距离较近的可以将养在皿/T75瓶/离心管内的新鲜细胞样本常温快递（最迟次日达）运输，本市内可闪送或亲自递送，距离较远的，可-80℃冻存细胞干冰运输；

组织样本&其他液体样本：-80℃冻存干冰运输。

八、需提供的试剂

结合蛋白特异性抗体50ul以上，浓度大于0.5mg/ml。

九、实验周期

2-3周

十、其他

探针序列，如无探针序列，请提供DNA结合蛋白相关信息或相关文献。