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细胞传代培养

细胞传代培养

简要描述:细胞传代培养:根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。

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所属分类:细胞生物学实验

更新时间:2021-09-22

厂商性质:代理商

详情介绍

细胞传代培养


根据细胞生长的恃点,细胞传代培养方法有3种:贴壁生长细胞传代、半悬浮生长细胞传代(Hela细胞)、悬浮生长细胞传代

◆ 贴壁生长的细胞用消化法传代;

◆ 部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;

◆ 悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。


实验材料:细胞、D-Hanks液、胎牛血清、DMEM培养基 / RPMI1640培养基、Penicillin-Streptomycin(P/S双抗)、胰蛋白酶

仪器与耗材:净化工作台、离心机、恒温水浴箱、冰箱、倒置相差显微镜、培养箱、玻璃瓶、细胞培养瓶/皿、废液缸、离心管、红血球计数板、不同规格的移液器及其配套的无菌吸头、吸管


1.  贴壁细胞的消化法传代:

1)先吸除或倒掉瓶内旧培养液。

2)D-Hanks液洗2~3次。

3)向瓶内加入适量消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面。(注意:胰蛋白酶要预温,温度37℃左右为宜。

4)消化最好在37℃环境下进行,消化2~5 min 后把培养瓶放置显微镜下进行观察,发现胞质回缩,细胞间隙增大后,应立即终止消化。

5)吸除或倒掉消化液,如用EDTA消化,需加Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶把残留消化液冲掉,再添加培养液。如仅用胰蛋白酶可直接加少许含血清的培养液,终止消化。

6)用弯头吸管,吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞。从培养瓶底部一边开始到另一边结束,以确保所有底部都被吹到,使细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔,不要用力过猛。 

7) 细胞计数后分别接种在新的培养瓶内。

8)置于37℃细胞培养箱培养。(注意:要定时观察细胞,如发现污染,应及时处理。

 

2.  悬浮细胞的传代:悬浮细胞传代可离心收集细胞后传代,或直接传代。

离心传代法:

1) 将细胞连同培养液一并转移到15 ml 离心管内。

2) 800~1000 rpm离心5 min。(注意:离心转速要合适。转速过低,不能有效分离细胞;离心速度过大,时间过长,会挤压细胞造成损伤甚至死亡。)

3) 弃去上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打形成细胞悬液。

4) 计数,分别接种在新的培养瓶内。

 直接传代法:

让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清液吸掉1/2~2/3,然后用吸管吹打形成细胞悬液后再传代。


3.  部分贴壁细胞的传代

1)部分贴壁不牢的细胞,如Hela细胞等,不经消化处理直接吹打可使细胞从壁上脱落下来,而进行传代。
2)对绝大部分贴壁生长的细胞,因直接吹打对细胞损伤较大,细胞常有较大数量的丢失,因而需消化后,才能吹打传代。



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