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组织免疫组化(IHC)

组织免疫组化(IHC)

简要描述:组织免疫组化(IHC)是以酶底物的显色反应对抗原进示踪,并对呈色反应后的免疫阳性物做半定量分析。组织免疫荧光(IF)是通过荧光抗体与细胞表面抗原的特异性结合后,于荧光显微镜下观察,可见明亮的特异荧光,即可对标本中的抗原物质进行鉴定。
周期:免疫组化1-2周,免疫荧光-普通荧光显微镜观察1-2周(≤50个样本),免疫荧光-共聚焦荧光显微镜3周(≤20个样本)。

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所属分类:病理形态学检测

更新时间:2021-10-09

厂商性质:生产厂家

详情介绍

组织免疫组化(IHC) 

实验方法

1)石蜡切片自37℃恒温箱过夜烤片后取出,室温放置5分钟后,双蒸水浸泡5分钟,0.01M PBS(pH7.2-7.4)浸洗5分钟×3次。

2)加入EDTA缓冲液,微波至沸腾拿出微波炉,自然冷却至室温。

3)0.1% triton X-100透膜10分钟。PBS洗三次。

4)3%过氧化氢(in PBS)RT,15min。重复此步骤操作1次。

5)用吸水纸擦干组织周围的玻片,用组化笔画圈,滴加免疫羊血清封闭30分钟(室温)或过夜(4℃)。

6)倾去封闭血清,不用清洗,直接滴加稀释好的一抗,4℃湿盒过夜。次日取出,倾去一抗,PBS清洗三次。

7)滴加稀释的二抗,37℃孵育1h。倾去二抗,PBS清洗3遍。

8)加DAB显色剂,每样加上100ulDAB,5-20s内显微镜下观察有无特异性信号。显色后立即用蒸馏水冲洗终止反应。如无特异性表达可适当延长DAB显色时间。

9)苏木精染色液复染,蒸馏水洗2min,苏木精复染10s-15min,蒸馏水洗,盐酸酒精(70%乙醇:盐酸=99:1)分化20s,蒸馏水洗,稀氨水(1%)反蓝10s。流水冲洗,镜下观察。

10)脱水透明,95%乙醇5min,100%乙醇5min,2次(2瓶无水乙醇).二甲苯Ⅰ10min二甲苯Ⅱ10min。封片,中性树胶封片。

实验周期:组织免疫组化(IHC)1-2周,组织免疫荧光(IF)-普通荧光显微镜观察1-2周(≤50个样本),组织免疫荧光(IF)-共聚焦荧光显微镜3周(≤20个样本)。


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